Caracterización taxonómica y análisis de la variabilidad del agente causal del cancro del tallo de la soja en Buenos Aires (2005/2007)

Recibido 05 de enero de 2011 // Aceptado 30 de agosto de 2011 // Publicado online 09 de noviembre de 2011

GRIJALBA, P.E.1; RIDAO, A.DELC.2; GUILLIN, E.3

Resumen
El complejo Diaporthe/Phomopsis es un importante grupo de hongos patógenos de la soja. Dentro del mismo, Diaporthe phaseolorum var. caulivora es uno de los agentes causales del cancro del tallo. Veintitrés aislamientos de este hongo, provenientes de diferentes zonas geográficas de la provincia de Buenos Aires, fueron caracterizados morfológica y genéticamente. Los criterios morfológicos fueron tipo y color de micelio; formación del teleomorfo y/o del anamorfo. La identificación molecular fue llevada a cabo utilizando una técnica de restricción de fragmentos de amplificación (PCR-RFLP) de la región ITS de ADN ribosomal. Adicionalmente, los productos de amplificación fueron secuenciados y comparados con la información de bancos de datos. Los aislamientos presentaron características morfológicas y patogénicas propias de la variedad, y los patrones de restricción con la enzima Alu I fueron concordantes con la identificación morfológica y con la información de secuencias disponibles. Las reconstrucciones filogenéticas apoyan la idea de que D. meridionalis y D. caulivora son entidades biológicamente aisladas. Los resultados obtenidos confirmaron la utilidad del uso del método de PCR-RFLP para la identificación precisa y rápida de D. caulivora. Por sus características, este método puede ser implementado para análisis de rutina en laboratorios de pequeña y mediana escala.

Palabras clave: Glycine max, Diaporthe phaseolorum var. caulivora, PCR-RFLP, ITS.

Abstract
Diaporthe/Phomopsis is an important group of soybean pathogens. Diaporthe phaseolorum var. caulivora is one of the causal agents of stem canker. Twenty three isolates from different regions from the Province of Buenos Aires were morphologically and genetically characterized and assigned to different taxa within the Diaporthe/Phomopsis complex; diagnostic morphological traits were: mycelium type and color, teleomorph/anamorph occurrence. Molecular characterization was carried out using RFLP analyses of PCR-amplified DNA (PCRRFLP) for the Internal Transcribed Spacer (ITS) of the ribosomal DNA (rDNA) region. PCR products were additionally sequenced and compared with information available. All isolates were morphologically assigned to D. phaseolorum var. caulivora; PCR-RFLP patterns with restriction enzyme Alu I were coincident with morphological identification and sequence information. Phylogenetic reconstructions supported the idea that D. caulivora and D. meridionalis constitute biologically isolated entities. Our results validated the use of a single enzyme PCR-RFLP method for fast and accurate identification of D. caulivora. This technique resulted appropriated for routine analysis in small/medium throughput laboratories.

Keywords: Glycine max, Diaporthe phaseolorum var. caulivora, PCR-RFLP, ITS.

1.- Facultad de Agronomía (UBA).
2.- Facultad de Ciencias Agrarias (UNMdP) Argentina
3.- Instituto de Genética, CNIA – INTA Castelar. e-mail: eguillin@cnia.inta.gov.ar

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